External Quality Control for inter-Batch comparison
Ricardo M. Borges
Abstract
Controle de Qualidade Externo (QCExt): A amostra contendo a cepa código CCMR0280 cultivada em paralelo a todos os lotes servirá como referência para estudos comparativos estudo de comparação entre as cepas do CCMR (Culture Collection of Microorganisms at the Federal University of Rio de Janeiro). Após secagem da biomassa, a nova amostra da cepa código CCMR0280 obtida no cultivo corrente será combinada com o estoque de CCMR0280-CQExt para distribuição equitativa de Controle de Qualidade inter-lote.
Este documento se baseia no artigo: Long-Term Metabolomics Reference Material. G.J. Gouveia, A.O. Shaver, B.M. Garcia, A.M. Morse, E.C. Andersen, A.S. Edison*, and L.M. McIntyre*. Analytical Chemistry. 2021, 93, 26, 9193–9199. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.1c01294
Steps
Material
microtubos de 2 mL com tampa de rosca* tudo de centrifugação de 50 mL tipo Falcon
- Balança analítica (AUW220 , Shimadzu)
Material em Estoque
Inicialmente, um lote inicial composto por 25 réplicas do cultivo da cepa código CCMR0280
foi (i) cultivado, (ii) coletado e combinado, (iii) submetido a liofilização e (iv) posteriormente triturado em pó
Esta amostra triturada está meticulosamente separada em 50, se possível, alíquotas de 50 mg em microtubos de 2 mL com tampa de rosca
Para cada lote a ser produzido
Em cada lote de cianobactérias cultivado para o estudo de comparação entre as cepas do CCMR, o cultivo da cepa código CCMR0280 será adicionado, mantendo o mesmo número de réplicas do estudo.
- Esta amostra será utilizada para controle de qualidade intra-lote e também fará parte da composição da amostra CCMR0280-CQExt que, por sua vez, será utilizada para controle de qualidade inter-lotes.
A cada lote de cepas a serem cultivadas, após a conclusão da etapa de coleta e liofilização da biomassa, uma amostra de CCMR0280-CQExt será adicionada como amostra de controle de qualidade
- O objetivo é minimizar a variância entre as amostras em todas as etapas de análises dos lotes, facilitando o processo de correção entre diferentes lotes.
Das amostras da cepa código CCMR0280 cultivadas a cada lote, após coleta da biomassa e liofilização, será retirada uma alíquota e combinada em um tudo de centrifugação de 50 mL tipo Falcon para a quantidade equivalente a pelo menos 100 mg
Essa amostra combinada será triturada e homogeneizada
Uma alíquota de 50 mg desta amostra (da cepa código CCMR0280 cultivadas em cada lote) será adicionada à sequência de amostras CCMR0280-CQExt
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As amostras CCMR0280-CQExt serão armazenadas em freezer a -20oC em uma caixa devidamente identificada. Cada nova amostra deverá ser etiquetada com o número de lote e data de produção.
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Neste momento, teremos uma série de alíquotas de 50 mg de amostras CCMR0280-CQExt , incluindo aquelas que serão produzidas a cada novo lote de cultivo
Quando chegar o momento de realizar a etapa de extração e preparo das amostras de cada lote, as 10 primeiras amostras CCMR0280-CQExt da série serão (i) reunidas, (ii) homogeneizadas e (iii) 5 alíquotas representativas de 50 mg serão adicionadas a sequência de extração
- Para o primeiro lote, as amostras de 1-10 serão utilizadas
- Para o segundo lote, as amostras de 2-11 serão utilizadas
- Para o terceiro lote, as amostras de 3-12 serão utilizadas
- Para o quarto lote, as amostras de 4-13 serão utilizadas, e assim por diante
O protocolo de extração das biomassas deverá ser seguido rigorosamente com todas as amostras de cada lote, incluindo essas 5 amostras CCMR0280-CQExt
Todas os dados analíticos adquiridos a partir das amostras CCMR0280-CQExt serão avaliadas quanto a sua homogeneidade
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10 das alíquotas produzidas inicialmente (step 3) serão separadas e submetidas a etapa de extração e preparo das amostras para aquisição dos dados analíticos
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Estes dados analíticos serão utilizados para comprovação de homogeneidade
