条带位置对了，结论还是虚：鉴定软件先核哪四图

凝胶上看着有一条“大概在那个位置”的带，软件也给出了预期长度，记录里就写鉴定通过。过两天复测或送测序，位点对不上。问题往往不是软件没算，而是四张图没有放在一起看：预期图谱、实际凝胶、对照体系、对象回写。

衍因智研分子 yanMolecule 适合把序列对象和鉴定附件留在附近，减少截图散落在聊天里。软件能辅助算出预期片段，不能代替读胶，也不能把“位置差不多”写成已经确认。继续加滤镜或自动识别之前，建议先核下面四图。

第一图：预期图谱，写清按哪一版序列切

鉴定软件输出的条带预测，必须指回当前采用的序列版本。空载、插入后、反向插入，预期长度会差一截。第一图要写：切的是哪一对象、用哪几把酶、线性化还是双切、预期几条带、各大约多少 bp。

预测前先锁对象，不要用文件名当版本

桌面上的 final 和当天日期，经常不是鉴定认的那一版。先打开对象，再跑预测。预测窗口关掉后，预期若只留在截图一角，第二图的实际条带就没有对照物。

第二图：实际凝胶，写清看的是哪一孔

实际图要能回答：哪一块胶、哪一孔、上样量大概多少、Marker 是什么、拍照时间。只发一张裁掉孔位的局部图，别人无法判断带是不是拖尾、是不是加样孔附近的亮团。

读胶结论写成事实，不要写成情绪。可以说“主带约在 3 kb 附近，另有弱带”，不要只写“看起来对”。位置估算可以粗，对象和孔位不能粗。

第三图：对照体系，写清这次凭什么信这条带

没有空载对照、没有单酶切对照、没有未酶切对照，软件预期再完整，也难以排除酶没切开或切错对象。第三图不一定每次四种对照都做，但要写清这次做了哪些、为什么不做哪些、缺对照时结论降到哪一级。

对照失败时，不要用软件预测去“救”实际图。预测不能证明酶有活性，也不能证明上样的是目标管。缺对照就标成待补，不要把主带位置写成已经鉴定成立。

第四图：对象回写，把前三图指回同一管

回写不是把凝胶照片丢进文件夹。要能从管号指回：预期按哪一版、实际看到什么、对照是否支持、采用还是弃用。弃用的克隆也留一行，避免把同一张“位置差不多”的照片反复解释成不同结论。

鉴定软件可以专门看预测，实验记录负责收口。平台能让附件靠得更近，不能替你判定这条带就是目标插入。

常见问题

单酶切鉴定能不能只看软件预测？

不能。单酶切更依赖对照和测序。软件只回答“如果对象和酶都对，大概会看到什么”。

条带比预期略大或略小，算不算通过？

先写差异，再决定是否送测序或重切。不要在记录里把“略有偏差”直接改成通过。采用与否由实验负责人按本实验室约定判断。

软件带自动识别条带，还要不要手写描述？

要。自动识别可作提示，孔位、杂带和拖尾仍要人看。识别结果指向哪一管，也要人确认。

鉴定不合格还要不要做第四图回写？

要。写清预期、实际和对照缺哪一块。只写失败，下周仍会按同一张局部图争论。

测序已经对了，酶切软件是不是可以不跑？

可以不作为放行依据，但仍建议留下当时有没有做过酶切核对。两种证据不要互相默默覆盖。

小结

条带位置看起来对、结论却发虚时，先把预期图谱、实际凝胶、对照体系和对象回写放在一起，而不是再找一个更能画预测带的软件。四图指回不了就降级结论。若希望鉴定附件挂在分子对象旁边，可以了解衍因智研分子如何辅助这四图对齐。