引物设计

引物加同源臂扩增不出来怎么办?这是许多分子生物学研究者常常面临的难题。扩增失败的原因有很多,可能是引物设计不当、PCR条件不合适、同源臂的长度和序列问题等。引物设计是整个PCR实验的关键,特异性不足可能导致非特异性扩增,甚至完全没有扩增。设计引物时,要确保Tm值相近,避免形成二聚体,并选择合适的引物长度,通常18-25个碱基是理想的选择。同源臂的长度和序列也非常重要,通常应在20-30个碱基之间,