独占鳌头的二代测序仪器-Illumina

admin 61 2025-02-14 14:45:08 编辑

Illumina作为测序行业的龙头企业,所占市场份额达70%(15年)。最初由四位博士于1998年共同创建,总部位于美国加利福尼亚圣地亚哥,主要销售微阵列芯片,于2000年在纳斯达克挂牌上市。2006年收购Solexa公司,获得新一代高通量测序技术,从而成为目前市场上的主流测序技术公司。

 

Illumina 旗下测序仪器

GA系列:Genome Analyzer, Genome analyzer IIx

HiSeq 系列: HiSeq 2000, HiSeq 2500, HiSeq3000, HiSeq 4000

Miseq系列

HiSeq X系列: HiSeq X Five, HiSeq X Ten

NextSeq系列:NextSeq 500, NextSeq 550

 

Illumina测序原理

Illumina测序采用边合成边测序技术(Sequencingby sythesis,SBS), 步骤如下:

 

Illumina测序采用边合成边测序技术(Sequencing by sythesis,SBS).步骤如下:

步骤一.建库,在DNA片段两端加上序列已知的通用接头构建文库,文库加载到测序芯片Flowcell

步骤二. 簇生成。文库两端的已知序列与Flowcell基底上的Oligo序列互补,每条文库片段都经过桥式PCR扩增形成一个簇

步骤三. 簇扩增及测序。与步骤二同时进行。即在碱基延伸过程中,每个循环反应只能延伸一个正确互补的碱基,根据四种不同的荧光信号确认碱基种类,保证最终的核酸序列质量,经过多个循环后,完整读取核酸序列。

 

什么是Flowcell?什么是Lane?

(图片摘自千年基因)

上图展示的是FlowCell, 以HiSeq2000为例:

每个flowcell有8个泳道,一个泳道称为一个Lane,每条Lane上有两列,每列有多个有小格子,叫一个tile。

测序仪器不同,可以放置的FlowCell个数和Lane的条数也有所区别。

 

下面一张图展示建库以及簇生成。

Illumina仪器系列介绍

1) Genome Analyzer,GA最初是Solexa公司自己推出的NGS系统。2006年Illumina公司收购了Solexa,在不断测序和改良后,推出了GA IIx和HiSeq2000平台。目前GA系列已不再出售。

2) HiSeq 系列。HiSeq2000发布后,2010年华大基因利用国开行给的贷款购买了128台HiSeq测序仪,这笔订单是Illumina迄今为止最大的一笔订单。后续通量不断扩大升级, 价格/G不断降低. HiSeq X Ten又是2014年推出的一个更大升级,将10台HiSeq X连接起来,当然仪器价格会高,但如果达到通量,单G数据成本也会大大降低。由于HiSeq X Ten价格太高,通量太大,2015年又推出了HiSeq X five, HiSeq X Ten的缩小版,由五台HiSeq X组成,同时推出的还有HiSeq 3000/4000和NextSeq 550.

其中Hiseq X Five和HiSeq X Ten显示为单台Hiseq X的性能。

3) MiSeq

测序时间快,可以用小基因组或者外显子的测序。测序成本相对HiSeq要高

4) NextSeq

NextSeq 500 于2014年初登陆市场,测序通量介于MiSeq与HiSeq之间,是目前最为灵活的测序平台,可以进行高中低通量的需求,例如外显子、转录组、人的全基因组测序等。2015年,新推出了NextSeq 550系统,整合了高通量测序和芯片扫描功能,测序模块与NextSeq 500完全相同,适用于细胞遗传学和生殖健康。

参考整理来自Illumina官方网站和网络资源

原文地址:http://blog.sina.com.cn/s/blog_5c2f929b0102w5b8.html

点击原文可以访问作者博客


欢迎关注

上一篇: 质粒构建工具推荐,实验室必备的分子克隆利器
下一篇: NATURE IMMUNOLOGY重磅:颠覆传统免疫原性细胞死亡认知
相关文章