分子生物学检测：临床应用与常用方法详解

分子生物学检测通过分析生物大分子（如DNA、RNA）的结构与功能，在疾病的预防、诊断、治疗和预后中发挥着至关重要的作用。其核心优势在于高灵敏度、高特异性和快速性，能实现早期诊断、精准分型和疗效监测。

一、临床应用领域

分子生物学检测的应用已渗透到临床的各个领域，主要包括以下几个方面：

1. 感染性疾病诊断与监测通过检测病原体（病毒、细菌等）的特异性核酸，实现精准诊断。

• 病毒性肝炎：

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    核酸定量：提高“窗口期”检出率；评估抗病毒疗效、判断预后；筛查血液制品。

  • 基因分型与耐药分析：指导乙肝、丙肝的个体化用药方案，及时发现耐药突变。

• 性传播疾病：如淋球菌、沙眼衣原体、解脲脲原体、单纯疱疹病毒等的核酸检测，用于快速诊断和疗效评价。

• 呼吸道感染：如肺炎支原体、结核分枝杆菌的核酸检测，为早期、快速诊断提供病原学依据，并评估治疗效果。

• 优生优育与围产期感染：如巨细胞病毒、单纯疱疹病毒的检测，用于评估先天感染、母婴传播风险，是致畸病因排查的关键。

• 其他重要感染：

  • EB病毒：辅助诊断感染，监测疗效。

  • 人乳头瘤病毒：用于宫颈癌早期筛查与尖锐湿疣辅助诊断，其分型（高危型如16/18，低危型如6/11）对风险评估至关重要。

  • B族链球菌：筛查孕产妇感染，预防新生儿感染。

  • BK病毒：监测肾移植术后感染。

2. 肿瘤个体化治疗通过检测肿瘤组织中的基因突变，为靶向药物选择提供科学依据，实现“精准医疗”。

• 常见靶点：如EGFR、KRAS、BRAF等基因。

• 临床意义：筛选可能从相应靶向药物中受益的患者（如EGFR敏感突变），并提示原发性耐药（如KRAS突变、EGFR T790M突变），避免无效治疗。

二、常用技术方法

分子生物学检测的技术多样，可根据不同检测目的选择相应方法。

1. 基于核酸扩增的技术

• PCR及其衍生技术：最常用的方法。通过特异性引物对目标病原体或基因的核酸片段进行指数级扩增，从而实现灵敏检测。包括实时荧光定量PCR（用于定量，如病毒载量检测）和常规PCR（用于定性或后续分析）。

2. 基于基因测序的技术

• 高通量测序：无需预设目标，可对样本中全部核酸进行测序，能一次性检出多种甚至未知病原体，特别适用于疑难、危重感染的确诊。

• 一代测序：用于对特定基因片段进行精确测序，如基因分型、耐药突变位点确认。

3. 其他技术

• 基因芯片：可同时检测多种病原体或多种基因突变，通量高，速度快。

• 细胞因子活性检测方法（用于免疫功能评估）：

  • 细胞增殖法：利用依赖细胞株测定IL-2等细胞因子的活性。

  • 靶细胞杀伤法：用于测定TNF等具有杀伤活性的细胞因子。

  • 细胞因子诱导产物分析法：通过测定诱导产生的次级产物来间接反映细胞因子活性。

  • 细胞病变抑制法：用于检测干扰素等能抑制病毒致细胞病变的因子。

三、专题聚焦：呼吸道感染的分子诊断

标题：呼吸道病原体分子检测：精准诊断的“侦察兵”

呼吸道感染的分子生物学检测，主要目标是快速、准确地鉴定引起感染的病原体。

• 核心方法：

  • 实时荧光定量PCR：是目前最主流的检测手段。针对特定病原体（如流感病毒、新冠病毒、肺炎支原体、结核杆菌）设计引物和探针，具有速度快、灵敏度高、可定量的优点，适用于临床疑似病例的快速确诊。

  • 高通量测序：当常规检测无法明确病原体，或怀疑是罕见、新发病原体感染时，该方法能进行无偏倚的广泛筛查，是诊断疑难呼吸道感染的“终极武器”。